免疫膠體金技術(shù)的基本原理:

膠體金在弱堿環(huán)境下帶負電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團形成牢固的結合，由于這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。 膠體金除了與蛋白質(zhì)結合以外，還可以與許多其它生物大分子結合，如SPA、PHA、ConA等。根據膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學(xué)特性，因而使膠體金廣泛地應用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細胞生物學(xué)等領(lǐng)域。 膠體金標記，實(shí)質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過(guò)程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面負電荷，與蛋白質(zhì)的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對蛋白質(zhì)有很強的吸附功能，可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價(jià)結合，因而在基礎研究和臨床實(shí)驗中成為非常有用的工具。 免疫金標記技術(shù)(Immunogold labelling technique) 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，在金標蛋白結合處，在顯微鏡下可見(jiàn)黑褐色顆粒，當這些標記物在相應的配體處大量聚集時(shí)，肉眼可見(jiàn)紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中，這一反應也可以通過(guò)銀顆粒的沉積被放大，稱(chēng)之為免疫金銀染色。

膠體金技術(shù)具有方便快捷、特異敏感、穩定性強、不需要特殊設備和試劑、結果判斷直觀(guān)等優(yōu)點(diǎn), 因而特別適合于廣大基層檢驗人員以及大批量檢測和大面積普查等, 具有巨大的發(fā)展潛力和廣闊的應用前景。

用容量瓶量取200ml超純水加入到 500ml錐形瓶中，將錐形瓶置于磁力加熱攪拌器加熱板上，放入磁力攪拌子，打開(kāi)攪拌旋鈕至適當速度。用移液器吸取2ml 1%氯金酸溶液于上述 200ml超純水中，攪拌1min，關(guān)閉攪拌旋鈕，打開(kāi)加熱旋鈕，加熱至沸騰。打開(kāi)攪拌旋鈕至適當速度，快速加入經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾。1% 檸檬酸三鈉溶液0.8ml，溶液在2分鐘內由灰色變黑色最后變?yōu)榧t色，再繼續加熱攪拌 10分鐘。關(guān)掉加熱旋鈕，適當速度攪拌至室溫，定容至200ml，4~C保存。

常用的免疫膠體金檢測技術(shù): (1)免疫膠體金光鏡染色法 細胞懸液涂片或組織切片，可用膠體金標記的抗體進(jìn)行染色，也可在膠體金標記的基礎上，以銀顯影液增強標記，使被還原的銀原子沉積于已標記的金顆粒表面，可明顯增強膠體金標記的敏感性。 (2)免疫膠體金電鏡染色法 可用膠體金標記的抗體或抗抗體與負染病毒樣本或組織超薄切片結合，然后進(jìn)行負染?？捎糜诓《拘螒B(tài)的觀(guān)察和病毒檢測。 斑點(diǎn)免疫金滲濾法 (3)應用微孔濾膜(如膜)作載體，先將抗原或抗體點(diǎn)于膜上，封閉后加待檢樣本，洗滌后用膠體金標記的抗體檢測相應的抗原或抗體。 (4)膠體金免疫層析法 將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結合墊上，當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過(guò)毛細作用向前移動(dòng)，溶解結合墊上的膠體金標記試劑后相互反應，當移動(dòng)至固定的抗原或抗體的區域時(shí)，待檢物與金標試劑的結合物又與之發(fā)生特異性結合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過(guò)肉眼觀(guān)察到顯色結果。該法現已發(fā)展成為診斷試紙條，使用十分方便。